珍藏版 史上最全的基因编辑常用技术指南(6)

4. 激活上调基因表达：将dCas9与转录激活肽融合可以增加特定基因的转录。合理设计gRNA序列以将dCas9激活子引导至感兴趣的基因的启动子或调控区域，实现基因的上调。
5. 干扰下调基因表达：将dCas9与转录抑制肽（如KRAB）融合，可以通过干扰转录来降低基因表达。
五、Sleeping Beauty transposon
睡美人转座子（Sleeping Beauty transposon）系统由两个部分组成：SB转座酶（催化转座所需的酶） 和含有可在基因组内移位的基因表达盒的转座子。
睡美人转座子被证明是无需使用病毒载体即可产生特定基因突变和基因破坏的工具。睡美人转座子同样可用于基因组编辑，可以作为CRISPR/Cas9技术的一种有价值的替代工具，并且睡美人转座子的使用可能会在未来几十年内有所增长。

如上图:
1. 转座子由位于质粒主链中目标基因（蓝色）侧翼的一组反向重复序列（绿色）组成。第二个质粒包含用于表达转座酶的转座酶基因（红色）;
2. 转座酶表达（红色星号）并结合反向重复序列（绿色）；发生核酸内切酶反应，切割DNA;
3. 释放的转座子可以与带有TA二核苷酸DNA链结合（在人类基因组中有许多这样的位点），除去转座子后，原始质粒为空，然后质粒被细胞降解;
4. 转座酶在DNA中产生双链断裂，并允许转座子整合。
借助随手可得的多种强大有效的基因编辑方法，我们已经进入了基因编辑的黄金时代。相信在以后会有越来越多的工作将注重于完善这些技术，以确保基因编辑的高特异性和高活性。
【参考文献】
1. Genesis. 2000 Feb;26(2):99-109. Cre recombinase: the universal reagent for genome tailoring;
2. Nature. 2019 Oct 21. doi: 10.https://imgs.wenkuwang.cc/upload/1038/s41586-019-1711-4. Search-and-replace genome editing without double-strand breaks or donor DNA;
3. Plasmids 101: A Desktop Resource Created and Compiled by Addgene March 2017 (3rd Edition);
4. CRISPR 101: A Desktop Resource Created and Compiled by Addgene May 2017 (2nd Edition).

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